水质细菌总数FISH检测技术的优化

汪河; 王莉; 申慧彦; 李卫华

文章摘要

汪河,王莉,申慧彦,李卫华.水质细菌总数FISH检测技术的优化[J].安徽建筑大学学报,2022,30(1):46-54

水质细菌总数FISH检测技术的优化

Optimization of Fluorescence in Situ Hybridization （FISH） for the Total Bacterial Count in Water

DOI：

中文关键词: 水质细菌总数 FISH技术优化稳定性

英文关键词: total bacterial count in water FISH technology optimization stability

基金项目:国家自然科学基金项目（51978003）；安徽省重点研发项目（1704a0902006）；安徽省科技重大专项（17030801028）

作者	单位
汪河	安徽建筑大学环境与能源工程学院，安徽合肥 230601；环境污染控制与废弃物资源化利用安徽省重点实验室，安徽合肥 230601
王莉	安徽建筑大学环境与能源工程学院，安徽合肥 230601；环境污染控制与废弃物资源化利用安徽省重点实验室，安徽合肥 230601
申慧彦	安徽建筑大学环境与能源工程学院，安徽合肥 230601；环境污染控制与废弃物资源化利用安徽省重点实验室，安徽合肥 230601
李卫华	安徽建筑大学环境与能源工程学院，安徽合肥 230601；环境污染控制与废弃物资源化利用安徽省重点实验室，安徽合肥 230601

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中文摘要:

在水质卫生检测方面，FISH 具有检测快速、可检测指标多样、检出微生物数量准确等优势。但因其结果稳定性较差，尚不能替代培养计数法成为标准方法。本研究从影响结果稳定性的细胞制片、蛋白酶 K 消化时间、探针浓度和杂交时间四个方面优化 FISH 技术。结果表明，46 ℃、2 h 烘烤制片可明显减少因洗涤造成的细胞流失；终浓度 10 μg/mL 的蛋白酶 K 经 37 ℃、2 min 消化可使样品得到较高的荧光信号且背景干扰少；探针终浓度 5 ng/μL，46 ℃、5 h 的条件下可促进寡核苷酸探针 EUB338 mix 与细菌细胞充分杂交。优化后的 FISH 定量结果较稳定，三次实验的荧光细胞数量无明显差异（P>0.05）。本研究为水质细菌总数检测的 FISH 法走向标准化提供了一定的技术基础。

英文摘要:

Fluorescence in Situ Hybridization （FISH） is a water testing technique with the advantages of rapid detection，various detectable indexes，and accurate detection of microbial quantities. However，its results are not stable enough to replace the counting method as a standard method. In this study，the FISH technique was optimized in four aspects，namely，cell sample preparation， proteinase K digestion time，probe concentration and hybridization time，which affect the stability of the results. The results showed that the washing-caused cell loss could be significantly reduced by baking the glass slides at 46 ℃ for 2 hours. The digestion of proteinase K at a final concentration of 10 μg/mL at 37 ℃ for 2 minutes could result in a high fluorescence signal with less background interference. The probe final concentration of 5 ng/μL at 46 ℃ for 5 hours could facilitate the hybridization of the oligonucleotide probe EUB338-mix and bacterial cells. The optimized FISH technique showed good stability，and there was no significant difference in the number of fluorescent cells among the three experiments （P>0. 05）. This study provides a technical basis for the standardization of FISH method for the detection of total bacterial count in water.

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